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petras03
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Betreff des Beitrags: Prüfungsfrage - Hilfe!!! Verfasst: 30.05.2012, 13:53 |
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Versuchskaninchen |
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Registriert: 28.05.2010, 22:19 Beiträge: 11
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Hallo, habe diese Prüfungsfrage gerade gefunden, blicke aber iwie nicht durch! Vielleicht kann mir ja irgendwer helfen!?
1.) A DNA-fragment (1500 bp) was digested by HindIII and ligated with a plasmid (2700 bp). How many fragments do you get if the transformed plasmid was digested by 1.) HindIII, 2.) EcoRI (the DNA-fragment does not have a EcoRI recognision sequence), and where would you see them after gel-electrophoresis? Es gab zwei Zeichnungen. Eine zeigte den Plasmidring mit Multiple Cloning Site (MCS), und bei der MCS ist auch dabeigestanden, welche Restriktionsenzyme in dieser MCS schneiden koennen. Da gab es eben, unter Anderem, eine Erkennungssequenz von HindIII und EcoRI. Die andere Zeichnung zeigte das Agarosegel mit Markern, an welcher Stelle die Banden welche Loesungen haben... ca. wie ein Massband (1000bp - 2000bp - 3000bp...). Man musste also nur einzeichnen, wo die Banden nach dem Verdauen ungefaehr zu sehen sind. Bei Frage 1 waeren das (glaub' ich) zwei Banden bei 1500 und bei 2700, bei Frage 2 waer' es nur eine Bande bei 4200. Aber keine Garantie fuer Richtigkeit!
Danke!
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sophv
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Betreff des Beitrags: Re: Prüfungsfrage - Hilfe!!! Verfasst: 31.05.2012, 10:00 |
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Versuchskaninchen |
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Registriert: 01.03.2011, 19:35 Beiträge: 45
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Also ich glaub es ergibt jeweils 2 Fragmente wenn man mit EcoRI und HindIII spaltet! Bei den Banden blick ich auch nicht durch... Hab die selbe Frage auch schon gestellt und noch keine Antwort bekommen ^^ Lg
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ChaoTic
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Betreff des Beitrags: Re: Prüfungsfrage - Hilfe!!! Verfasst: 26.09.2012, 09:40 |
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Laborjunky |
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Registriert: 30.11.2008, 17:45 Beiträge: 561
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*push*
kennt jmd die genaue antwort darauf?
lg
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berry
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Betreff des Beitrags: Re: Prüfungsfrage - Hilfe!!! Verfasst: 26.09.2012, 13:26 |
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Eprouvettenschüttler/in |
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Registriert: 07.09.2010, 15:05 Beiträge: 174
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Ich habe eine Theorie dazu, aber keine Ahnung, ob sie stimmt Also: Die DNA hat ja für EcoRI keine recognision site, kann also von ihr nicht geschnitten werden, weshalb sich hier nur eine Bande ergibt bei 1500 + 2700 = 4200 bp - für das andere RE gibts eine Erkennungssequenz, es wird also zwischen Insert und Plasmid geschnitten - dadurch ergeben sich 2 Banden, eine bei 1500 und eine bei 2700 bp
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lmbt1110
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Betreff des Beitrags: Re: Prüfungsfrage - Hilfe!!! Verfasst: 26.09.2012, 14:03 |
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Versuchskaninchen |
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Registriert: 03.11.2011, 19:26 Beiträge: 66
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Ich würde dass so beantworten:
In der MCS gibt es sowohl für EcoRi als auch für HindIII die passende Erkennungssequenz - sprich beide können hier schneiden. Im Insert ist jeweils am Anfang und am Ende eine Erkennungssequenz für HindIII also kann diese auch hier schneiden.
Bei der Verdauung durch HindIII würden also 3 Fragmente, bei der Verdauung durch EcoRI 2 Fragmente entstehen.
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leben
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Betreff des Beitrags: Re: Prüfungsfrage - Hilfe!!! Verfasst: 26.09.2012, 14:11 |
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Eprouvettenschüttler/in |
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Registriert: 01.10.2010, 10:26 Beiträge: 133
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Hallo, könnte vielleicht jamand diese Fragen beantworten:
1) Tricky-Beispiel: Plasmitvektor (mit Restriktionsschnittstellen) mit bp geg. und daneben eine Agarose-Gelplatte mit Längensatndards. Plasmid wird mit HindII geschnitten und Insert ebenfalls, Insert wird hinein ligiert. 1) Kloniertes Plasmid wird mit HindIII verdaut 2) Kloniertes Plasmid wird mit EcoR1 verdaut Wie viele Banden sind bei 1) und 2) zu erwarten und diese einzeichnen?
2)Genotyp 4 Fragmente welches ist das bei 500bp, wie kann man es Lösen?
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berry
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Betreff des Beitrags: Re: Prüfungsfrage - Hilfe!!! Verfasst: 26.09.2012, 14:39 |
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Eprouvettenschüttler/in |
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Registriert: 07.09.2010, 15:05 Beiträge: 174
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Zitat: Bei der Verdauung durch HindIII würden also 3 Fragmente, bei der Verdauung durch EcoRI 2 Fragmente entstehen. Ich verstehe den Gedankengang, aber wie kommst du auf 3 Fragmente? Das Plasmid ist ja quasi ein Ring - wenn ich irgendwo in diesem Ring an 2 Stellen schneide, bleiben 2 Teile übrig, nämlich der Rest vom Ring und der Teil zwischen den Schnittstellen. Auf 3 Fragmente kann man da glaub ich mit der Annahme, dass es nur ein Insert gibt, garnicht kommen?!
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lmbt1110
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Betreff des Beitrags: Re: Prüfungsfrage - Hilfe!!! Verfasst: 26.09.2012, 14:49 |
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Versuchskaninchen |
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Registriert: 03.11.2011, 19:26 Beiträge: 66
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berry hat geschrieben: Zitat: Bei der Verdauung durch HindIII würden also 3 Fragmente, bei der Verdauung durch EcoRI 2 Fragmente entstehen. Ich verstehe den Gedankengang, aber wie kommst du auf 3 Fragmente? Das Plasmid ist ja quasi ein Ring - wenn ich irgendwo in diesem Ring an 2 Stellen schneide, bleiben 2 Teile übrig, nämlich der Rest vom Ring und der Teil zwischen den Schnittstellen. Auf 3 Fragmente kann man da glaub ich mit der Annahme, dass es nur ein Insert gibt, garnicht kommen?! Ich bin davon ausgegangen dass neben der MCS (1* Schnittstelle) zusätzlich noch der Insert mit Schnittstellen (1* links und 1* rechts) vorhanden ist. Was wenn ich nochmal darüber nachdenke ziemlich unrealistisch ist ! Aber wir haben ja leider keine Map des Plasmid also ist die Beantwortung eher schwer !
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klaramo
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Betreff des Beitrags: Re: Prüfungsfrage - Hilfe!!! Verfasst: 27.09.2012, 14:39 |
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Versuchskaninchen |
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Registriert: 17.11.2010, 17:29 Beiträge: 28
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hab schon ein paar Leute gefragt weil ich mir immer gedacht habe, da muss doch irgendwo der Hund drin stecken - die kann nicht so leicht zu beantworten sein. Inzwischen glaub ich und alle anderen auch. - 2 Banden mit HndIII (Insert und offener Vektor - könnte auch drei Banden geben oder eine verschmierte wenn sich der Vektor wieder "zusammenklebt" oder coiled... aber das will er glaub ich gar nicht wissen) und bei EcoRi haben wir einfach in offenes Plasmid + Insert .. aber linear - also eine Bande
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