Hallo!
Geht um den E.coli Teil. Bin mir gerade unsicher wie lang die bei der PCR amplifizierten Fragmente sind.
Bei der insilico Klonierung am ersten Tag hat es nämlich soweit ich mich erinnern kann, geheißen, dass das Fragment ohne GFP Insert 192bp lang sein soll. Also von T7 terminator primer (
256bp - 274bp) bis T7 promotor primer (429bp -
448bp) -> 192bp. Allerdings hängen ja an den beiden verwendeten Primern noch jeweils 6 Basen, die die site für die Restriktionsenzyme bilden. Also müsste das Fragment doch eigentlich 192 + 12 = 204bp lang sein, weil die 6 Basen für die Restriktionsstelle ja nicht mit der templateDNA hybridisieren, sondern nur angefügt sind, damit das GFP (im Fall des Vektors mit Insert) dann wieder so geschnitten werden kann, dass es als Insert in den Vektor passt.
Hoffe das ist halbwegs verständlich so
Danke!