Statistiken
Posts
28.678
Topics
29.570
LBT USER
11.384
 
 
Im Forum online
206
Besucher
0
Registrierter
205
Gäste
Mitglieder: 0 Mitglieder
 
 
LBT - Lebensmittel und Biotechnologie :: Thema anzeigen - Proteinsequenzierung über cDNA-Klonierung
LBT - Lebensmittel und Biotechnologie
http://www.lbtforum.at/forum/

Proteinsequenzierung über cDNA-Klonierung
http://www.lbtforum.at/forum/viewtopic.php?f=37&t=5214
Seite 1 von 1

Autor:  robi313 [ 08.02.2013, 20:18 ]
Betreff des Beitrags:  Proteinsequenzierung über cDNA-Klonierung

Hi Leute,

ich lerne gerade für die Prüfung am 22. (letzter Thread is auch von mir, wär echt super wenn wer die Fragen posten würde) und steh bei einem Abschnitt voll auf der Leitung.

In der 6. Folie, Biochemische Arbeitsmethoden, S. 49-51 wird erkläre wie man die Proteinsequenz über "Umwege" mittels cDNA Sequenzierung erhält. Dann sind da richtig komplizierte Abbildungen die das ganze erklären sollen. Ich habe leider die Essenz von dem Ganzen überhaupt nicht verstanden, wie kann man aus cDNA auf die Proteinsequenz des ursprünglichen Proteins schließen?

Ergebensten Dank für die Antworten,
Robin

Autor:  Max [ 12.02.2013, 15:34 ]
Betreff des Beitrags:  Re: Proteinsequenzierung über cDNA-Klonierung

Hallo,

ALso vorweg: Habe die Folien nie gesehen und keine Ahnung von der Prüfung.
Aber vom Verständnis her:

cDNA erhält man per Reverser Transkriptase von RNA... also praktisch mischt man Primer, Buffer, Reverse Transkriptase + RNA und macht dann die RT Reaktion auf einer "normalen" PCR.
So bekommt man aus der einsträngigen RNA die "dazugehörige" doppelsträngige cDNA.

RNA codiert ja für Aminosäuren und damit für Proteine. Kann mir also vorstellen dass es praktisch auch einen Weg in die Andere Richtung gibt um von cDNA->RNA->Proteine zu kommen.

Autor:  moritz7 [ 11.11.2013, 12:59 ]
Betreff des Beitrags:  Re: Proteinsequenzierung über cDNA-Klonierung

Ablauf ist wie es dort steht der folgende:

S-Alkylierung (Spaltung von Disulfidbrücken) , Trypsin- Verdau (ganzes Protein wäre zu groß, so kriegt man einzelne Fragmente)

diese Fragmente werden mittels RP-HPLC voneinander getrennt und ein paar davon mittels Edman-Abbau sequenziert

so jetzt hast du einen Teil der Peptidsequenz deines Proteins, den du jetzt in die dazugehörigen Basentripletts übersetzt .. und wenn ich das richtig verstanden habe kann man dann (wenn man das Genom des betreffenden Organismus kennt) mit dieser DNA- Sequenz in ner Datenbank nach Übereinstimmungen suchen und quasi so auf die restliche DNA- Sequenz = Aminosäuresequenz kommen.

Seite 1 von 1 Alle Zeiten sind UTC
Powered by phpBB © 2000, 2002, 2005, 2007 phpBB Group
http://www.phpbb.com/